Kürzlich veröffentlichte die FDA einen Leitfaden für Arzneimittelhersteller zur Kontrolle von Nitrosaminverunreinigungen in Medikamenten [1]. Die Anwesenheit von Nitrosamin in Arzneimitteln kann für Patienten riskant sein, da diese Verbindungen bereits in Spuren krebserregend sind. Durch die Kontrolle und Überwachung der Nitritkonzentration in pharmazeutischen Produkten und Rohstoffen kann die Bildung von Nitrosaminen jedoch vermieden werden. Die Entwicklung von Verfahren zur Reduzierung oder Eliminierung der Nitrosaminbildung erfordert empfindliche Analysemethoden zur Bestimmung von Nitrit in komplexen Matrices.
Dimethylamin wird bei der Synthese vieler Arzneimittel verwendet. Bei saurem pH-Wert reagiert Dimethylamin mit Nitrit unter Bildung von Nitrosaminen [2]. Duloxetinhydrochlorid ist ein pharmazeutischer Wirkstoff (API) gegen Depressionen und andere Erkrankungen des Nervensystems. Diese Application Note beschreibt die Analyse von Nitrit in Duloxetinhydrochlorid mittels Ionenchromatographie (IC) unter Verwendung einer Metrosep A Supp 10-Säule mit direkter UV/VIS-Detektion bei 215 nm. Für die Probenvorbereitung wird die intelligente Anreicherungstechnik mit Matrixeliminierung (MiPCT-ME) von Metrohm verwendet.
Duloxetinhydrochlorid wurde als Pulver von einem Pharmaunternehmen bezogen. Ungefähr 0,05 g Probe wurden genau abgewogen und in einen sauberen 10-ml-Messkolben mit 5,0 ml hochreinem Wasser (UPW) überführt. Der Inhalt wurde mit einem Vortex-Mischer gelöst (ca. 5 min) und mit UPW bis zur Marke aufgefüllt. Ein 0,1-ml-Aliquot von 1,0 mol/l Natriumhydroxid wurde zugegeben und der Inhalt gemischt. Die vorbereitete Probenlösung wurde mit einem 0,2-μm-Spritzenfilter filtriert und anschließend durch eine IC-Ag-Probenvorbereitungskartusche geleitet, um Chloridionen zu entfernen. Bei der automatisierten Probenvorbereitung (MiPCT-ME) wurden 2 ml der Probenlösung angereichert und die Matrix mit 3 ml UPW entfernt.
Es wurde eine Einpunktkalibrierung mit 4 μg/L NO2- erstellt. Der Nitritstandard wurde aus einem 1000 mg/L NIST-zertifizierten Standard (Sigma TraceCERT Nr. 67276) hergestellt.
Die vorbereitete Probenlösung wurde direkt mit MiPCT-ME (Abbildung 1) injiziert und mit den in Tabelle 1 angegebenen Methodenparametern analysiert.
Die Anionen wurden auf einer Metrosep A Supp 10 - 250/4.0 Säule getrennt und der Hintergrund wurde durch sequentielle Suppression auf ein Minimum reduziert. Das UV/VIS-Detektorsignal bei 215 nm wurde aufgezeichnet. Die Gesamtlaufzeit betrug 40 Minuten. Die Genauigkeit der Methode wurde überprüft, indem die Proben mit 4 μg/L NO2- aufgestockt und anschließend die Wiederfindung ausgewertet wurde.
Tabelle 1. IC-Methodenparameter zur Bestimmung von Nitritverunreinigungen in Duloxetinhydrochlorid-API.
| Säule | Metrosep A Supp 10 - 250/4,0 |
|---|---|
| Eluent | 5,0 mmol/L Natriumcarbonat 5,0 mmol/L Natriumhydroxid |
| Flussrate | 1,0 ml/min |
| Säulentemp. | 45 °C |
| Injektionsvolumen | 2 ml (Anreicherungsvolumen) |
| Detektion | UV-Detektion bei 215 nm |
Nitrit wurde in Duloxetinhydrochlorid gemäß der USP <621> mit einer chromatographischen Trennmethode quantifiziert (Abbildung 2) [3].
Unter Verwendung des MiPCT-ME-Setups erwies sich die Methode als hochempfindlich und war in der Lage, Spuren von Nitrit in der Probenmatrix zu quantifizieren. Die Methodengenauigkeit, die mit Hilfe der Aufstockungsversuche untersucht wurde, erreichte Wiederfindungsraten zwischen 80 und 120 %
Die vorgestellte IC-Methode mit der Metrosep A Supp 10-Säule kann zur Quantifizierung von Spuren von Nitrit in Duloxetinhydrochlorid gemäß USP <621> verwendet werden. Die hohe Empfindlichkeit wurde durch die Anreicherung der Probe erreicht und die störende Probenmatrix wurde mit einer Inline-Matrixeliminierungstechnik entfernt. Dieses Verfahren ist präzise und robust, und im Gegensatz zu manuellen Anreicherungstechniken ist für diesen automatisierten Inline-Prozess kein zusätzlicher Arbeitsaufwand erforderlich.
- UNS Ministerium für Gesundheit und menschliche Dienste, Lebensmittel- und Arzneimittelbehörde; Zentrum für Arzneimittelbewertung und -forschung (CDER). Kontrolle von Nitrosamin-Verunreinigungen in Humanarzneimitteln – Leitfaden für die Industrie. Pharmazeutische Qualität/Herstellungsstandards/Aktuelle Gute Herstellungspraxis (CGMP) 2021.
- UNS Pharmakopöe. USP-NF Nitrosamin-Verunreinigungen. Allgemeines Kapitel. https://doi.org/10.31003/USPNF_M15715_02_01.
- 〈621〉 Chromatographie. https://doi.org/10.31003/USPNF_M99380_01_01.
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