Die FDA hat kürzlich einige Leitlinien zum Umgang mit Nitrosaminverunreinigungen in pharmazeutischen Produkten veröffentlicht [1]. Selbst in Spurenmengen gefährdet die Anwesenheit krebserregender Nitrosamine in Medikamenten die Sicherheit der Patienten. Die Kontrolle der Nitritkonzentration in pharmazeutischen Produkten und Prozessen kann dazu beitragen, die Bildung von Nitrosaminen zu verhindern. Aus diesem Grund ist die Bestimmung von Nitrit in pharmazeutischen Produkten und deren Rohstoffen mit empfindlichen Analysemethoden unerlässlich.
Dimethylamin wird häufig zur Synthese verschiedener Medikamente verwendet. Unter sauren Bedingungen reagiert es mit Nitrit und bildet Nitrosamine [2]. Dies gilt auch für die Herstellung von Hydroxypropylmethylcellulose (Hypromellose), einem häufigen Hilfsstoff. Diese Application Note behandelt die Bestimmung von Nitrit in Hydroxypropylmethylcellulose mittels Ionenchromatographie (IC) unter Verwendung einer Metrosep A Supp 10-Säule und direkter UV/VIS-Detektion bei 215 nm. Die Probenvorbereitung erfolgt mit der intelligenten Anreicherungstechnik von Metrohm mit Matrixeliminierung (MiPCT-ME).
Hydroxypropylmethylcellulose (Hypromellose) wurde als Pulver von einem Pharmaunternehmen bezogen. Es wurden ungefähr 0,1 g des Pulvers genau abgewogen und in einen sauberen 10-ml-Messkolben mit 5,0 ml hochreinem Wasser (UPW) überführt. Der Inhalt wurde mit einem Vortex-Mischer etwa 20 Minuten lang aufgelöst und der Kolben bis zur Marke mit UPW aufgefüllt. Die vorbereitete Probenlösung wurde durch einen 0,2-μm-Spritzenfilter filtriert und vor der Analyse einem geschlossenen Probengefäß auf einen Autosampler gestellt.
Es wurde eine Einpunktkalibrierung mit 4 μg/L NO2- durchgeführt. Dieser Standard wurde aus einem 1000 mg/L NIST-zertifizierten Standard (Sigma TraceCERT Nr. 67276) hergestellt.
Die Probe wurde gemäß der USP <621> mit einer chromatographischen Trenntechnik analysiert [3] (Abbildung 1). Es wurde ein MiPCT-ME Aufbau in Verbindung mit den Methodenparametern in Tabelle 1 eingesetzt. 2-ml der Probe wurden auf einer Metrosep A PCC 2 HC/4.0 angereichert und die Matrix mit 3 ml hochreinem Wasser entfernt.
Nach der Injektion wurden die Anionen innerhalb von 45 Minuten isokratisch auf einer Metrosep A Supp 10 - 250/4,0 Säule getrennt. Das UV/VIS-Detektorsignal wurde bei 215 nm aufgezeichnet. Die Bestätigung der Methodengenauigkeit erfolgte durch Aufstockungsversuche. Die Probe wurde mit einem Nitritstandard in zwei Konzentrationsstufen (1,0 μg/L und 4 μg/L) versetzt und die Wiederfindungswerte ausgewertet.
Tabelle 1. IC-Methodenparameter zur Bestimmung von Nitritverunreinigungen in Hydroxypropylmethylcellulose (Hypromellose).
| Säule | Metrosep A Supp 10 - 250/4,0 |
|---|---|
| Eluent | 5,0 mmol/L Natriumcarbonat 5,0 mmol/L Natriumhydroxid |
| Flussrate | 1,0 ml/min |
| Säulentemp. | 45 °C |
| Injektionsvolumen | 2 ml (Anreicherungsvolumen) |
| Detektion | UV/VIS-Detektion bei 215 nm |
Nitrit wurde in Hydroxypropylmethylcellulose quantifiziert (Abbildung 2). Die Methode war empfindlich genug, um Spuren von Nitrit in der Probenmatrix zu quantifizieren. Die zweistufigen Aufstockungsversuche bestätigten die Genauigkeit der Methode und erzielten Wiederfindungen zwischen 80 und 120 %.
Mit der vorgestellten IC-Methode ist eine Quantifizierung von Nitrit in Hydroxypropylmethylcellulose gemäß USP <621> möglich. Die Anreicherung der Probe bietet eine höhere Empfindlichkeit für die genaue Bestimmung von Spurenmengen an Nitrit. Durch die Inline-Matrixeliminierung wird die störende Probenmatrix vor der Injektion entfernt, wodurch die Ergebnisse weiter verbessert werden. Die Trennung von Nitrit von anderen Matrixkomponenten wurde mit der Metrosep A Supp 10-Säule erreicht. Die Genauigkeit der Methode wurde durch Aufstockungsversuche bestätigt.
Diese IC-Methode eignet sich zur Qualitätskontrolle von Nitritverunreinigungen in pharmazeutischen Herstellungsprozessen mit dem Hilfsstoff Hydroxypropylmethylcellulose.
- UNS Ministerium für Gesundheit und menschliche Dienste, Lebensmittel- und Arzneimittelbehörde; Zentrum für Arzneimittelbewertung und -forschung (CDER). Kontrolle von Nitrosamin-Verunreinigungen in Humanarzneimitteln – Leitfaden für die Industrie. Pharmazeutische Qualität/Herstellungsstandards/Aktuelle Gute Herstellungspraxis (CGMP) 2021.
- UNS Pharmakopöe. USP-NF Nitrosamin-Verunreinigungen. Allgemeines Kapitel. https://doi.org/10.31003/USPNF_M15715_02_01.
- 〈621〉 Chromatographie. https://doi.org/10.31003/USPNF_M99380_01_01.
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