El monofluorofosfato (MFP) se utiliza a menudo para la remineralización del esmalte dental y para prevenir la caries dental.1]. Los fabricantes y laboratorios farmacéuticos están obligados a utilizar las monografías de la Farmacopea y el Formulario Nacional de los Estados Unidos (USP-NF) para evaluar la calidad de los medicamentos y las formulaciones, incluida la MFP.
La USP ha iniciado una iniciativa global para modernizar muchas de sus monografías existentes. La cromatografía iónica (IC) con detección de conductividad suprimida ha sido aprobada por la USP como método validado para cuantificar el contenido de MFP en monofluorofosfato de sodio.2].
La separación requerida de MFP del sulfato es posible utilizando Metrosep A Supp 16 - 250/4.0 (L91) columna y un gradiente de hidróxido. Se cumplen todos los criterios de aceptación para la monografía de la USP «Monofluorofosfato de sodio» y el procedimiento fue aprobado como método USP validado [2–5].
La solución de idoneidad del sistema y la solución estándar se preparan a partir de estándares certificados por la USP mediante dilución con agua ultrapura (UPW).
La solución de idoneidad del sistema contiene 4,0 μg/mL de ER Fluoruro de Sodio USP, 1,4 μg/mL de ER Acetato de Sodio USP, 150,0 μg/mL de ER Monofluorofosfato de Sodio USP y 150,0 μg/mL de ER Sulfato de Sodio USP. La solución estándar contiene 150,0 μg/mL de ER Monofluorofosfato de Sodio USP.
Los análisis de muestras se realizaron con monofluorofosfato de sodio proporcionado por el cliente (Na2FOP3). De esto, se pesaron 1,5 g y se añadieron a un matraz aforado de 1000 ml. El matraz se llenó hasta la marca con UPW, se sonicó durante 15 minutos y finalmente se filtró a través de papel de filtro con un tamaño de poro de 0,2 µm. Esta solución madre de muestra se diluyó adicionalmente 1:10 con UPW. La concentración final corresponde a 150 μg/ml de monofluorofosfato. No se requiere preparación adicional de la muestra.
La solución de idoneidad del sistema, las muestras y las soluciones estándar se inyectaron directamente en el CI utilizando un procesador de muestras profesional 858 (Figura 1).
La separación inicial de fluoruro, acetato, monofluorofosfato y sulfato se aseguró aplicando un gradiente de hidróxido de potasio (Tabla 2, eluyente A 100 mmol/L de hidróxido de potasio, eluyente B agua ultrapura) y utilizando la columna Metrosep A Supp 16 (listado USP L91). La detección de analitos se logró con detección de conductividad suprimida químicamente.
La calibración se realizó utilizando un único estándar de monofluorofosfato de sodio de 2,0 μg/ml inyectado seis veces. La muestra fue analizada por duplicado.
Tabla 1. Requisitos para el método IC según la monografía de la USP «Monofluorofosfato de sodio» [2].
| Columna L91 packing | Metrosep A Supp 16 - 250/4.0 |
|---|---|
| Tasa de flujo | 1,0 ml/min |
| Eluyente | Eluyente A: 100,0 mmol/L Hidróxido de potasio Eluyente B: Agua ultrapura |
| Temperatura | 40ºC |
| Volumen de inyección | 10 µl |
| Detección | Conductividad suprimida |
Tabla 2. Programa de gradiente binario para la Monografía USP «Monofluorofosfato de sodio» [2].
| Tiempo (minutos) | Eluyente A (%) | Eluyente B (%) |
|---|---|---|
| 0,0 | 15 | 85 |
| 20,0 | 15 | 85 |
| 30,0 | 30 | 70 |
| 35,0 | 60 | 40 |
| 45,0 | 60 | 40 |
| 45,1 | 15 | 85 |
| 50,0 | 15 | 85 |
El método IC para la determinación del contenido de monofluorofosfato está calificado de acuerdo con la Monografía de la USP «Monofluorofosfato de sodio» siguiendo las referencias de la USP para los procedimientos de validación del método [2–5]. En la siguiente figura se muestra un cromatograma para la aprobación de idoneidad del sistema. Figura 2.
Los tiempos de retención relativos para fluoruro, acetato, monofluorofosfato y sulfato son 0,20, 0,26, 1,00 y 1,06, respectivamente. Estos valores sin unidades se calculan automáticamente con el software MagIC Net aplicando la siguiente fórmula:
rGRAMO = tiempo de retención relativo, sin ajustar
tRhode Island = tiempo de retención pico de interés
tprimero = tiempo de retención pico del pico de referencia (pico correspondiente a la sustancia a examinar, monofluorofosfato)
Se cumplen todos los criterios de aceptación para la idoneidad del sistema (resolución, factor de cola y desviación estándar relativa de inyecciones estándar replicadas) (Tabla 3).
Tabla 3. Requisitos de idoneidad del sistema según USP.
| Parámetro | Actual | Requisito USP | Estado |
|---|---|---|---|
| Resolución monofluorofosfato/sulfato | 1,84 | No menos 1.5 | Aprobar |
| Factor de coleo | 1,02 | No más de 2,5 | Aprobar |
| *DSR (%); n=6 | 0,38 | NMT 2.0 | Aprobar |
* Desviación estándar relativa de seis inyecciones repetidas de la solución estándar
Los resultados de la solución de muestra (Tabla 4) se calculan de la siguiente manera:
rUd. = respuesta máxima de monofluorofosfato de la solución de muestra
rS = respuesta máxima de monofluorofosfato de la solución estándar
CS = concentración de ER Monofluorofosfato de Sodio USP en la solución estándar (μg/mL)
CUd. = concentración de monofluorofosfato de sodio en la solución de muestra (μg/mL)
Tabla 4. Análisis de muestras de monofluorofosfato de sodio y requisitos según la USP.
| Analito | Actual | Requisito USP | Estado |
|---|---|---|---|
| MFP de sodio [%] | 95,56 | 91,7–100,5 | Aprobar |
El método IC presentado ha sido calificado con éxito para evaluar el contenido de monofluorofosfato de acuerdo con la monografía de la USP «Monofluorofosfato de sodio». Esta calificación siguió estrictamente las especificaciones de validación de la USP.
La idoneidad del sistema cumplió con todos los criterios de aceptación, incluida la resolución, el factor de cola y la desviación estándar relativa de inyecciones estándar replicadas. Además, el análisis de la muestra también cumplió con los requisitos de la USP.
Como resultado, se ha demostrado que el análisis con cromatografía iónica es un enfoque confiable y apropiado para la determinación de monofluorofosfato en formulaciones farmacéuticas. Los fabricantes de monofluorofosfato de sodio se benefician del alto grado de automatización y de su facilidad de uso.
- Vogel, G. L.; Mao, Y.; Chow, L. C.; et al. Fluoride in Plaque Fluid, Plaque, and Saliva Measured for 2 Hours after a Sodium Fluoride Monofluorophosphate Rinse. Caries Research 2000, 34 (5), 404–411. https://doi.org/10.1159/000016615.
- U. S. Pharmacopeia/National Formulary. USP Monographs, Sodium Monofluorophosphate; USP/NF, Rockville, MD, USA.
- U. S. Pharmacopeia/National Formulary. <621> Chromatography. In General Chapter; USP/NF, Rockville, MD, USA.
- U. S. Pharmacopeia/National Formulary. General Chapter, <1065> Ion Chromatography; USP-NF: Rockville, MD, USA, 2023. https://doi.usp.org/USPNF/USPNF_M897_01_01.html.
- U. S. Pharmacopeia/National Formulary. General Chapter, <1225> Validation of Compendial Procedures; USP-NF: Rockville, MD, USA, 2023. https://doi.org/10.31003/USPNF_M99945_04_01.
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