Recientemente, la FDA publicó un documento de orientación para los fabricantes farmacéuticos sobre el control de las impurezas de nitrosamina en los medicamentos.1]. La presencia de nitrosamina en los medicamentos puede ser riesgosa para los pacientes, ya que estos compuestos son cancerígenos, incluso en niveles traza. Sin embargo, la formación de nitrosamina se puede evitar controlando y monitoreando la concentración de nitrito en productos farmacéuticos y materias primas. El desarrollo de procesos para reducir o eliminar la formación de nitrosaminas requiere métodos analíticos sensibles para la determinación de nitrito en matrices complejas.
La dimetilamina se utiliza durante la síntesis de muchos productos farmacéuticos. En condiciones de pH ácido, la dimetilamina reacciona con el nitrito para formar nitrosaminas.2]. El clorhidrato de duloxetina es un ingrediente farmacéutico activo (API) contra la depresión y otras enfermedades del sistema nervioso. Esta nota de aplicación describe el análisis de nitrito en clorhidrato de duloxetina con cromatografía iónica (IC) utilizando una columna Metrosep A Supp 10 con detección directa UV/VIS a 215 nm. Para la preparación de muestras se utiliza la técnica inteligente de preconcentración con eliminación de matriz (MiPCT-ME) de Metrohm.
El clorhidrato de duloxetina se recibió en forma de polvo de una empresa farmacéutica. Se pesaron con precisión aproximadamente 0,05 g de muestra y se transfirieron a un matraz volumétrico limpio de 10 ml que contenía 5,0 ml de agua ultrapura (UPW). El contenido se disolvió usando un mezclador vórtex (aproximadamente 5 min) y se rellenó hasta la línea con UPW. Se añadió una alícuota de 0,1 ml de hidróxido de sodio 1,0 mol/l y se mezclaron los contenidos. La solución de muestra preparada se filtró usando un filtro de jeringa de 0,2 µm y luego se pasó a través de un cartucho de preparación de muestra de IC-Ag para eliminar los iones de cloruro. Con la preparación automatizada de muestras (MiPCT-ME), se preconcentraron 2 ml de la solución de muestra y la matriz se eliminó usando 3 ml de UPW.
Se realizó una calibración de un solo punto con 4 μg/L de NO2- preparado a partir de un estándar certificado NIST de 1000 mg/L (Sigma TraceCERT No. 67276).
La solución de muestra preparada se inyectó directamente usando MiPCT-ME (Figura 1) y analizado utilizando los parámetros del método indicados en tabla 1.
Los componentes aniónicos se separaron isocráticamente en un Metrosep A Supp 10 - columna 250/4.0 y el fondo se redujo al mínimo con supresión secuencial. Se registró la señal del detector UV/VIS a 215 nm. El tiempo total de ejecución fue de 40 minutos. La precisión del método fue confirmada por un estudio en el que las muestras se enriquecieron con 4 μg/l de NO.2- y se evaluaron los valores de recuperación.
Tabla 1. Parámetros del método IC para la determinación de impurezas de nitrito en API de clorhidrato de duloxetina.
| Columna | Metrosep A Supp 10 - 250/4.0 |
|---|---|
| Eluyente | 5,0 mmol/L de carbonato de sodio 5,0 mmol/L de hidróxido de sodio |
| Tasa de flujo | 1,0 ml/min |
| Temperatura de la columna. | 45 ºC |
| Volumen de inyección | 2 ml (volumen de preconcentración) |
| Detección | Detección UV a 215 nm |
El nitrito se cuantificó en clorhidrato de duloxetina con un método de separación cromatográfica como se describe en USP <621> (Figura 2) [3].
Al utilizar la configuración MiPCT-ME, se descubrió que el método era altamente sensible y capaz de cuantificar niveles traza de nitrito presentes en la matriz de la muestra. La precisión del método, confirmada por el estudio de adición, alcanzó valores de recuperación de entre el 80 y el 120 %.
El método IC presentado con la columna Metrosep A Supp 10 se puede utilizar para cuantificar niveles traza de nitrito en clorhidrato de duloxetina según USP <621>. La alta sensibilidad se logró mediante el uso de preconcentración y la matriz de muestra que interfiere se eliminó con una técnica de eliminación de matriz en línea. Este procedimiento es preciso y sólido y, a diferencia de las técnicas de preconcentración manual, no se necesita trabajo adicional para este proceso automatizado en línea.
- U.S. Departamento de Salud y Servicios Humanos Administración de Alimentos y Medicamentos; Centro de Evaluación e Investigación de Medicamentos (CDER). Control de impurezas de nitrosamina en medicamentos para uso humano: orientación para la industria. Calidad farmacéutica/Estándares de fabricación/Buenas prácticas de fabricación actuales (CGMP) 2021.
- U.S. Farmacopea. Impurezas de nitrosamina USP-NF. Capítulo general. https://doi.org/10.31003/USPNF_M15715_02_01.
- 〈621〉 Cromatografía. https://doi.org/10.31003/USPNF_M99380_01_01.
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