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La adición de tintes para proporcionar una coloración uniforme y mejorar el atractivo visual en los productos alimenticios es una práctica común. La rodamina B es un colorante muy utilizado en aplicaciones biotecnológicas e industriales y es uno de los diversos colorantes cuyo uso como aditivo alimentario está prohibido en Europa y América del Norte. Los métodos analíticos más comunes para la detección de colorantes ilícitos en los productos alimentarios, GC/MS y HPLC, son métodos instrumentales de laboratorio que requieren una formación especializada. Con Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer), la detección de trazas de rodamina B en la pimienta de cayena molida es rápida y fácil tras un sencillo procedimiento de extracción con un mínimo consumo de material. La rodamina B se puede detectar en polvo de cayena a una concentración de 50 μg/g. Sin embargo, un simple paso de concentración mejora ese límite a 10 μg/g.

La pimienta de cayena molida comprada comercialmente se dopó con rodamina B (RhB) y se probó con Misa para simular un escenario realista de detección de alimentos.

Espectro de referencia estándar Gold NP SERS de rodamina B.
Figure 1. Espectro de referencia estándar Gold NP SERS de rodamina B.

Para establecer un espectro de referencia, se analizó un estándar de RhB puro (50 μg/g en agua ultrapura) utilizando nanopartículas de oro (Au NP). El espectro SERS único que se muestra en Figura 1 se puede utilizar para crear una entrada de biblioteca para RhB.

Adición de la solución de muestra al vial para la medición

Se preparó una solución madre de RhB en metanol. El polvo de cayena comprado se trató con diluciones en serie del stock (3 ml de stock por 1 g de cayena) para producir muestras con 1000, 500, 100, 50, 10, 5 y 1 μg/g de RhB. Las muestras se mezclaron completamente y se secaron al aire. Para preparar los extractos, se agregaron 0,1 g de cada muestra enriquecida a un vial con 400 μL de metanol, se agitó para mezclar y se dejó reposar durante 10 minutos. Para preparar las muestras de prueba, se pipetearon 50 μL del extracto de metanol en un vial con 400 μL de solución de Au NP y 50 μL de solución de sal de 0,5 mol/L. El vial se agitó para mezclar y luego se colocó en el accesorio del vial en Misa para realizar la prueba.

Tabla 1. Parámetros Experimentales
Aparato Adquisición
firmware 0.9.33 Potencia del láser 5
Software MisaCal V1.0.15 En t. Tiempo 10 segundos
misa vial Adjunto archivo 6.07505.040 Promedios 10
Kit de identificación - Au NP 6.07506.440 Trama EN

En Figura 2, los espectros superpuestos de RhB indican una detección de hasta 50 μg/g. Para cada concentración probada, el espectro de referencia de la pimienta de cayena sin adulterar se restó del promedio de las mediciones repetidas corregidas de la referencia.

Figure 2. Perfil de concentración de Gold NP SERS de RhB extraído de polvo de cayena adulterado. Los espectros se establecen en línea base, con Au NP y el control sustraídos.

Para mejorar la detección de trazas y la relación señal-ruido espectral, se aplicó un método de concentración muy simple a cada extracto. Todos los extractos se secaron completamente al aire y luego se resuspendieron en metanol para producir un aumento de concentración de 5x. Los espectros en figura 3 demostrar la detección de RhB hasta 10 μg/g.

Figure 3. Perfil de RhB después de una concentración de 5x.

Detección de Rodamina B en el campo

Usando el extremo grande de la cuchara, agregue 3 o 4 cucharadas de muestra a un vial de 2 ml. Agregue metanol al vial hasta que ~1/3 lleno. Tape y agite suavemente el vial para mezclar, luego deje reposar la muestra durante 2 minutos. Llene un vial limpio hasta la mitad llena de Au NP. Usando pipetas, agregue 1 gota de cada uno de solución de muestra y solución de NaCl a las NP de Au, luego tape y agite el vial suavemente para mezclar. Insertar en accesorio de vial en Misa para la medición.

Tabla 2. Requisitos para el protocolo de prueba de campo
Kit de identificación - Au NP 6.07506.440
incluye: Nanopartículas de oro (Au NP)
Cucharón
Pipetas desechables
viales de vidrio de 2 ml
Reactivos  
Metanol  
solución de NaCl 3 g de NaCl en 100 ml de agua
Configuración de prueba Utilizar Kit de identificación OP en MISA

Los niveles de trazas de detección, la facilidad de preparación de muestras y los tiempos rápidos de análisis en conjunto recomiendan a Misa como una solución confiable y rentable para la identificación in situ de alto rendimiento de productos alimenticios adulterados.

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