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La auramina O (AO) es un colorante industrial que se utiliza para una amplia gama de productos manufacturados y como tinte fluorescente para detectar bacterias acidorresistentes en muestras clínicas. Debido a su intensa coloración amarilla, la AO también es apreciada como aditivo para mejorar el atractivo visual de los productos alimentarios elaborados de forma ilícita. El curry en polvo es un objetivo probable para tal adulteración, ya que es una mezcla de varias especias de color amarillo brillante. Los peligros para la salud asociados con la ingestión, e incluso el manejo inadecuado de AO, incluyen un alto riesgo de varios tipos de cáncer, toxicidad neural y hepática, e incluso la muerte. A pesar de las prohibiciones impuestas a la AO como aditivo alimentario, las pruebas de vigilancia indican su uso persistente como adulterante en alimentos y especias.

Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer) logra la detección rápida y sensible de AO en polvo de curry en un formato de ensayo simple.

Misa es una herramienta versátil para la detección rápida y precisa de colorantes alimentarios prohibidos. Esta nota de aplicación detalla un procedimiento de extracción fácil para detectar AO en polvo de curry adulterado.

Espectro de referencia SERS estándar de auramina O.
Figure 1. Espectro de referencia SERS estándar de auramina O.

Para establecer un espectro de referencia para AO, se analizó un estándar puro en agua alcalina (100 μg/mL, pH 13) utilizando nanopartículas de oro (Au NP). El espectro SERS único que se muestra en Figura 1 se puede utilizar para crear una entrada de biblioteca para AO.

https://s7e5a.scene7.com/is/image/metrohm/5163-Misa-samples-user?ts=1641567315431&dpr=off

En una prueba simulada de AO en polvo de curry, AO sólido se mezcló con polvo de curry comprado para producir un rango de concentración de muestras de prueba enriquecidas: 1000, 100, 10, 5 y 1 µg/g. La extracción líquida de AO fue se realiza agregando 1 mL de 0.1 mol/L NaOH a 100 mg de muestra en un vial de vidrio. Esta suspensión se mezcló y se deja reposar por 2 minutos. Acetato de etilo (EA, 1 mL) y NaCl (100 mg) se agregaron al vial, que luego se invirtió suavemente unas cuantas veces (no agite vigorosamente) para promover la extracción de AO en la capa EA. Después de 10 minutos, 50 μL de la parte superior EA La capa se agregó a un vial que contenía 400 μL de Au NP y 50 μL de NaCl 0,5 mol/L. El vial se agitó para mezclar e inmediatamente se coloca en el accesorio del vial  en Misa para medir.

Tabla 1. Parámetros experimentales
Aparato Adquisición
firmware 0.9.33 Potencia del láser 5
Software MisaCal V1.0.15 En t. Tiempo 10 segundos
misa vial Adjunto archivo 6.07505.040 Promedios 10
Kit de identificación - Au NP 6.07506.440 Trama EN

Los espectros SERS superpuestos y corregidos en la línea base de extractos básicos de EA de polvo de curry enriquecidos con concentraciones variables de AO demuestran una detección confiable de hasta 1 μg/g (Figura 2). Nota: Los picos en los espectros AO SERS muestran cambios relacionados con el solvente y el pH.

Figure 2. Rango de detección de AO con Misa y Au NPs.

Detección de Auramina O en el campo

Usando el extremo grande de la cuchara, agregue 3 o 4 cucharadas de muestra a un vial de 2 ml. Agregue la solución de NaOH al vial hasta la mitad. Agregue 3 o 4 cucharadas de NaCl sólido, luego llene vial hasta el tope con acetato de etilo. Tapar e invertir el frasco varias veces para mezclar, pero no agite el vial vigorosamente. Dejar reposar la muestra durante 5 minutos, como se formarán distintas capas. llenar un vial limpio medio lleno con Au NP. Usando pipetas, agregue 2 gotas de cada uno de los capa superior de la solución de muestra y la solución de NaCl para Au NPs, tape y agite suavemente el vial para mezclar. Insertar en el accesorio del vial en Misa para la medición.

Tabla 2. Requisitos para el protocolo de prueba de campo
Kit de identificación - Au NP 6.07506.440
incluye: Nanopartículas de oro (Au NP)
Cucharón
Pipetas desechables
viales de vidrio de 2 ml
Reactivos  
solución de NaOH 0,4 g de NaOH en 100 ml de agua
NaCl sólido  
Acetato de etileno  
solución de NaCl 3 g de NaCl en 100 ml de agua
Configuración de prueba Utilizar Kit de identificación OP en MISA

La detección fácil y sensible de AO en polvo de curry adulterado se demuestra utilizando Misa. Este análisis requiere una capacitación mínima del usuario y un mínimo de consumibles, lo que lo convierte en una plataforma analítica ideal para las pruebas de control de calidad in situ en las instalaciones de fabricación, envío y recepción de alimentos. La portabilidad y facilidad de uso de Misa en la detección de trazas de colorantes ilícitos supera los complejos procedimientos de extracción y análisis en un entorno de laboratorio.

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