L'acetato di calcio funziona come legante del fosfato nel tratto gastrointestinale, aiutando a ridurre i livelli elevati di fosfato nei soggetti con malattie renali che ricevono un trattamento di dialisi [1,2]. Per soddisfare i rigorosi standard di qualità dei prodotti farmaceutici, produttori e laboratori devono utilizzare metodi convalidati dalla Farmacopea degli Stati Uniti – Formulario nazionale (USP-NF). In precedenza, tali metodi includevano la titolazione o la cromatografia liquida (LC) con rilevamento UV. Nell’ambito dei loro sforzi di modernizzazione, l’USP ha aggiornato la monografia del calcio per includere l’analisi cromatografica ionica (IC), che è più semplice e sensibile rispetto ai metodi precedenti. Per il dosaggio dell'acetato di calcio, l'USP specifica la cromatografia ionica utilizzando una colonna a scambio cationico con materiale della colonna L76 e rilevamento della conduttività non soppressa per quantificare la quantità di ioni calcio nelle capsule di acetato di calcio [3].
L'attuale metodo IC utilizza una colonna Metrosep C 6 - 150/4.0 (L76) per separare il calcio dagli altri ioni nelle capsule di acetato di calcio. Questo metodo è stato convalidato secondo i capitoli generali USP <621> Cromatografia [4] e <1225> Validazione delle procedure compendiali [5]. Sono soddisfatti tutti i criteri di accettazione per il dosaggio dell'acetato di calcio nella monografia USP «Calcium Acetate Capsules».
La soluzione standard contiene nominalmente 0,08 mg/mL di standard di riferimento dell'acetato di calcio USP (Cat# 1086334) in acqua. Viene preparato pesando accuratamente 80,0 mg di standard di riferimento dell'acetato di calcio USP e trasferendolo in un matraccio tarato pulito da 1000 ml. Si scioglie e si porta a volume con acqua ultrapura (UPW).
Per le soluzioni madre dei campioni contenenti nominalmente 6,7 mg/mL di acetato di calcio, una parte adeguata del contenuto di almeno 20 capsule viene trasferita in un matraccio tarato da 2000 mL. L'UPW viene aggiunto a circa il 40% del volume finale del matraccio tarato e la soluzione viene quindi sonicata per 30 minuti con agitazione intermittente. Successivamente la soluzione viene portata a volume con UPW e filtrata su carta da filtro da 0,2 μm.
Per le soluzioni campione contenenti nominalmente 0,08 mg/mL di acetato di calcio, 5,97 mL di soluzione madre del campione vengono trasferiti in un matraccio volumetrico pulito da 500 mL. Questo viene diluito e portato a volume con UPW. Tutte le soluzioni vengono sonicate per 5 minuti prima dell'iniezione.
I campioni vengono iniettati direttamente nell'IC con un 919 IC Autosampler plus (Figura 1).
I cationi vengono separati utilizzando una colonna Metrosep C 6 -150/4.0 (L76) a rilevati con conduttività non soppressa (Tabella 1). Il tempo di esecuzione è stato di 40 minuti, il che è conforme ai requisiti USP di 1,5 volte il tempo di ritenzione del picco del calcio (qui: 24 minuti).
Per la quantificazione è stata utilizzata una calibrazione a un punto con la soluzione standard di 0,08 mg/mL di acetato di calcio USP. I campioni sono stati valutati come triplicati. Gli studi di ripetibilità vengono eseguiti con iniezioni pari a 6 volte.
| Column with L76 packing | Metrosep C 6 - 150/4.0 |
|---|---|
| Eluent | 0.75 mmol/L dipicolinic acid + 1.7 mmol/L nitric acid |
| Flow rate | 0.9 mL/min |
| Temperature | 35 °C |
| Injection volume | 10 μL |
| Detection | Direct conductivity |
I parametri del metodo IC seguivano i requisiti del test USP per l'acetato di calcio (Tabella 2). I cromatogrammi non hanno mostrato alcuna interferenza o contaminazione e il picco del calcio è eluito dopo 24 minuti (Figura 2).
Tutti i risultati dei test di convalida rientravano nei requisiti USP specificati. L'efficienza della colonna era eccezionale con >5900 piastre teoriche. La deviazione standard relativa per un'iniezione standard pari a 6 volte è stata dello 0,4% (requisito USP <2,0%). La quantità misurata di acetato di calcio nelle capsule era ben correlata alla quantità di acetato di calcio etichettata, ad esempio la percentuale calcolata era pari al 102,6% del contenuto etichettato (90,0-110,0% è accettabile) (Tabella 2). Pertanto, il metodo IC era adatto per determinare il calcio nelle capsule di acetato di calcio.
| Parameter | Result | USP requirement |
|---|---|---|
| Theoretical plates | 5909 | NLT 1000 |
| RSD % (n = 6) | 0.406% | NMT 2.0% |
| Percentage of labeled amount | 102.6% | 90.0−110.0% |
Secondo la monografia USP per le capsule di acetato di calcio [3], il dosaggio dell'acetato di calcio prevede la determinazione del contenuto di calcio mediante cromatografia ionica (IC) su una colonna di separazione con materiale di riempimento L76 (qui: Metrosep C 6). I risultati della validazione hanno soddisfatto tutti i requisiti della monografia e hanno aderito alle linee guida specificate nei capitoli generali USP <621> Cromatografia e <1225> Validazione delle procedure compendiali [4,5]. Il metodo IC descritto è appropriato per quantificare il calcio nelle capsule di acetato di calcio.
- Biruete, A.; Gallant, K. M. H.; Lindemann, S. R.; et al. Phosphate Binders and Nonphosphate Effects in the Gastrointestinal Tract. Journal of Renal Nutrition 2020, 30 (1), 4–10. DOI:10.1053/j.jrn.2019.01.004
- Sekar, A.; Kaur, T.; Nally, J. V.; et al. Phosphorus Binders: The New and the Old, and How to Choose. CCJM 2018, 85 (8), 629–638. DOI:10.3949/ccjm.85a.17054
- U.S. Pharmacopeia. USP-NF Calcium Acetate Capsules. Monograph. DOI:10.31003/USPNF_M11403_08_01
- <621> Chromatography, General Chapter; U.S. Pharmacopeia/National Formulary: Rockville, MD.
- 〈1225〉 Validation of Compendial Procedures; General Chapter; U.S. Pharmacopeia/National Formulary: Rockville, MD. DOI:10.31003/USPNF_M99945_04_01
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