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Il Pyrimethanil è un fungicida ad ampio spettro. Poiché le viti sono soggette ai funghi patogeni, nelle attività di viticoltura su larga scala si utilizza il Pyrimethanil come parte di un trattamento misto. Sebbene l'analisi chimica dei vini post-fermentazione trovi quantità di residuo da basse a non rilevabili, il Pyrimethanil è un sospetto cancerogeno per l'uomo e l'esposizione cronica può provocare tossicità multiorgano in alcune specie animali. La FDA statunitense e l'UE hanno stabilito un livello massimo consentito di 5 μg/mL di pirimetanil nei prodotti vinicoli finiti per bilanciare i potenziali rischi per la salute con un'industria vinicola sostenibile.

I metodi standard per rilevare il pirimetanil nei vini in bottiglia includono GC, LC e test immunologici di laboratorio. Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer) integra il rilevamento, l'elaborazione dei dati e la condivisione dei risultati in un sistema intuitivo per test in loco ad alto rendimento. In questa Application, il rilevamento di tracce di Pyrimethanil nel vino con Misa richiede poche forniture di laboratorio e un'elaborazione minima del campione, ma restituisce risultati rapidi.

Questa Application Note descrive una procedura per il rilevamento di tracce di pirimetanil nel vino bianco. Un processo di estrazione del campione molto semplice che si traduce in un rilevamento SERS molto sensibile del Pyrimethanil con Misa e nanoparticelle d'oro (Au NPs).

Per stabilire uno spettro di riferimento, lo standard di Pyrimethanil puro a una concentrazione di 10 μg/mL in etanolo è stato analizzato con Au NPs. Lo spettro SERS unico mostrato in Figura 1 può essere utilizzato per creare una voce nella libreria per il pirimetanil.

Figure 1. Spettro del pirimetanil Au NP SERS di riferimento standard unico.
https://metrohm.scene7.com/is/image/metrohm/5157-2?ts=1646663715278&dpr=off

Il vino bianco è stato addizionato ad una soluzione madre di Pyrimethanil in etanolo per fornire un intervallo di concentrazione dei campioni da testare: 10, 5 e 1 μg/mL, 500 e 100 ng/mL. Il Cloroformio (0,5 mL) è stato aggiunto a 1 mL di ciascuna concentrazione di campione in una fiala di vetro. Questa miscela è stata agitata vigorosamente e lasciata riposare per almeno 5 minuti per consentire la separazione delle fasi. Si noti che tempi di riposo più lunghi migliorano i risultati. Facendo attenzione a non disturbare lo strato inferiore di cloroformio, 200 μL dello strato superiore sono stati trasferiti in una seconda fiala e asciugati su una piastra calda. Il residuo essiccato è stato risospeso in 450 μL di soluzione Au NP e 50 μL di 0,5 mol/L NaCl e agitato bene per mescolare. Questa fiala è stata inserita nell'attacco per fiala Misa per la misurazione.

Tabella 1. Parametri sperimentali
Strumento Acquisizione
Firmware 0.9.33 Potenza laser 5
Software Misa Cal V1.0.15 int. Ora 10 sec
Fiala Misa Allegato 6.07505.040 medie 10
Kit di identificazione - Au NP 6.07506.440 Raster SU

Gli spettri Au NP SERS sovrapposti con correzione della linea di base acquisiti per l'intervallo di concentrazione degli estratti del test dimostrano un rilevamento fino a 100 ng/mL (figura 2), un livello notevolmente inferiore ai livelli massimi consentiti per il residuo di pirimetanil nel vino.

Figure 2. Spettri Au NP SERS sovrapposti, corretti per la linea di base e sottratti dal fondo del pirimetanil estratto dal vino.

Rilevazione di Pyrimethanil in campo

Riempite a metà una fiala con del vino bianco. Usando una pipetta, aggiungi 10 gocce di cloroformio a questa fiala. Copri e agita molto bene per amalgamare e lascia riposare per almeno 5 minuti in modo che gli strati si separino. Rimuovi con cautela una parte dello strato superiore con una pipetta pulita e versa 4 gocce di questa soluzione in una fiala pulita. Fai evaporare il liquido su una piastra calda. Riempi questa fiala a metà con Au NPs e aggiungi 1 goccia di NaCl, poi tappa e agita. Inserisci nell'attacco della fiala su Misa per la misurazione.

Tabella 2. Requisiti per il protocollo di test sul campo
Kit ID - Au NP 6.07506.440
include: Nanoparticelle d'oro (Au NP)
Notizia in anticipo
Pipette monouso
Fiale di vetro da 2 ml
Reagenti  
Cloroformio  
soluzione di NaCl 3 g di NaCl in 100 ml di acqua
Impostazioni di prova Utilizzo Kit ID OP su MISA

Misa fornisce una soluzione altamente sensibile ed economica per rilevare il Pyrimethanil nel vino. Con la portabilità di Misa, i livelli di residui di pesticidi possono essere valutati in modo rapido e affidabile nelle aziende vinicole durante il processo di produzione, nonché nelle strutture commerciali di stoccaggio, spedizione e ricezione.

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