Il Blu Brillante (BB) FCF, più comunemente noto come FD&C Blue #1, è il colorante blu più comunemente usato in tutto il mondo per alimenti e bevande. Generalmente, è accettato come sicuro e non tossico. Fatta eccezione per gli alimenti che riportano la dicitura biologico in etichetta o per quelli privi di coloranti artificiali, l'uso del colorante BB a livelli pari o superiori a100 μg/g negli alimenti è accettato senza troppe obiezioni.
Questa applicazione per Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer) è unica. Il vantaggio è duplice: rilevamento con successo di un colorante fluorescente e tecnica di pulizia del campione unica, che permette il rilevamento di un obiettivo senza segnale SERS forte e presente in una matrice complessa. È noto che l'identificazione Raman può essere sopraffatta dalla fluorescenza e talvolta SERS può essere utilizzato come metodo di rilevamento alternativo. Oltre ad essere un colorante fortemente fluorescente, BB ha un segnale SERS debole; il rilevamento di tali bersagli richiede spesso un'ampia estrazione del campione prima che il segnale SERS sia rilevabile. Sebbene lo strumento Misa riesca a rilevare con successo la presenza del colorante BB nel campionamento diretto, in questa applicazione si descrive un metodo di estrazione semplice in grado di migliorare la capacità di rilevamento del colorante BB con Misa.
Questa Application Note descrive una procedura per il rilevamento di BB in una miscela di bevande aromatizzate. Il test si basa sull'acquisizione di spettri SERS specifici per BB in estratti acquosi e cloroformici utilizzando Misa e nanoparticelle d'oro (Au NPs).
Per stabilire uno spettro di riferimento, lo standard BB puro a una concentrazione di 500 μg/mL in acqua è stato analizzato utilizzando Au NPs. Lo spettro SERS unico mostrato in Figura 1 può essere utilizzato per creare una voce nella libreria per BB.
In un test diretto per la presenza di BB in una miscela di bevande aromatizzate, 100 mg di miscela di bevande «lampone blu» sono state sciolte in 1 ml di acqua. 50 μL di questa soluzione sono stati aggiunti a una fiala contenente 450 μL di Au NP, seguiti da 50 μL di 0,5 mol/L NaCl. La fiala è stata agitata brevemente e inserita nell'attacco della fiala su Misa per la misurazione.
Lo spettro risultante, visto in figura 2, mostra un certo accordo di picco con lo spettro di riferimento. Tuttavia, la figura 2 differisce per intensità e forma dallo spettro di riferimento di BB, a causa della complessa matrice del campione. I segnali provenienti da altri componenti del mix possono compromettere la corrispondenza della libreria e l'identificazione del target; quindi, è stato impiegato un semplice processo di estrazione per migliorare il segnale SERS per BB.
In una fiala di vetro, 40 mg di campione sono stati sciolti in 1 mL di soluzione di benzetonio cloruro (2 mg/mL in acqua). Il benzetonio Cl è un tensioattivo cationico utilizzato per catturare il colorante anionico. Il Cloroformio (0,5 mL) è stato aggiunto a questa fiala, la miscela è stata agitata su vortice per 30 secondi e quindi lasciata a riposo per 5 minuti per consentire la separazione di fase. 200 μL dello strato inferiore di cloroformio sono stati accuratamente trasferiti mediante pipetta in una fiala fresca, che è stata posta su una piastra calda per l'essiccazione per evaporazione. Successivamente, al residuo essiccato sono stati aggiunti 450 μL di Au NP e 50 μL di 0,5 mol/L NaCl. Questa fiala è stata tappata, agitata per miscelare e immediatamente collocata nell'attacco della fiala su Misa per la misurazione.
Gli spettri impilati dentro Figura 3 confermano che questa semplice pulizia del campione produce uno spettro BB con un profilo molto più vicino allo spettro di riferimento.
| Strumento | Acquisizione | ||
|---|---|---|---|
| Firmware | 0.9.33 | Potenza laser | 5 |
| Software | Misa Cal V1.0.15 | int. Ora | 10 sec |
| Misa Fiala Allegato | 6.07505.040 | medie | 10 |
| Kit di identificazione - Au NP |
6.07506.440 | Raster | SU |
Rilevamento di Brillante Blu sul campo
Utilizzando l'estremità grande del misurino, aggiungi 3-4 misurini di campione in una fiala da 2 ml. Utilizzando pipette pulite per ciascun reagente, aggiungi la soluzione di benzetonio Cl alla fiala fino a metà, seguita da 10 gocce di cloroformio. Chiudi e agita energicamente la fiala per mescolare, quindi lascia riposare il campione per 5 minuti. Utilizzando una pipetta, rimuovi con cautela una parte delpl strato inferiore e aggiungi 8 gocce di questo estratto ad un fiala pulita, quindi lascia evaporare il solvente riscaldandolo su una piastra calda. Riempi questa fiala a metà con Au NPs, aggiungi 4 gocce di soluzione di NaCl, tappa e agita delicatamente la fiala per mescolare. Inserisci nell'attacco della fiala su Misa per la misurazione.
| Kit ID - Au NP | 6.07506.440 |
|---|---|
| include: | Nanoparticelle d'oro (Au NP) |
| Notizia in anticipo | |
| Pipette monouso | |
| Fiale di vetro da 2 ml | |
| Reagenti | |
| Benztonio Cl | 0,2 g in 100 ml di acqua |
| Cloroformio | |
| soluzione di NaCl | 3 g di NaCl in 100 ml di acqua |
| Impostazioni di prova | Utilizzo Kit ID OP su MISA |
Misa conferma con successo la presenza di un colorante fluorescente in una matrice alimentare complessa. L'identificazione del Blu brillante in una miscela di bevande aromatizzate è unico in quanto supera la fluorescenza evitando al contempo un'ampia pulizia del campione, un'elaborazione spettrale avanzata e la complessità e il costo della strumentazione di laboratorio. Contatta Metrohm per consigli Raman sull'adattamento della tua applicazione personalizzata per Misa.
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